Produkte aus der kundenspezifischen Synthese

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• Modifizierte Base
• Synthese im großen Maßstab
• Mehrere Zahlen
• Langkettige Oligonukleotide
• Synthese in In-vivo-Qualität und nach GMP-Standards

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Unsere Kompetenzen im Bereich RNA

Wir bieten verschiedene Qualitätsstufen an, um unterschiedlichen Forschungsanforderungen gerecht zu werden, wobei die Spezifikationen entsprechend der Länge der Oligonukleotide festgelegt sind.

Note	Reinheit	Identifizierung (MS)	Na Form	Endotoxin
RP-Kartusche	—		—	—
HPLC	≤ 99 mer: 90 % ≥ 100 mer: 80 %	Theoretisches Molekulargewicht (MW) ≤ 99 mer: ± 2 Da ≥ 100 mer: ± 3 Da	—	—
HPLC Plus	≤ 99 mer: 90 % ≥ 100 mer: 80 %	Theoretisches Molekulargewicht (MW) ≤ 99 mer: ± 2 Da ≥ 100 mer: ± 3 Da	Ja	—
In-vivo-EXP	≤ 99 mer: 90 % ≥ 100 mer: 80 %	Theoretisches Molekulargewicht (MW) ≤ 99 mer: ± 2 Da ≥ 100 mer: ± 3 Da	Ja	≤ 0,5 EU/mg

Die technischen Daten können je nach Länge, Sequenz und chemischen Modifikationen des Oligonukleotids variieren.

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Synthese in In-vivo-Qualität

Spezifikationen zu Güteklassen und Qualität

Für experimentelle Anwendungen, die zusätzliche Qualitätsanforderungen stellen, ist Oligonukleotid-DNA in In-vivo-Qualität erhältlich.

Informationen zur Produktion in größerem Maßstab und zu unseren CDMO-Dienstleistungen finden Sie unter Seite zur kommerziellen Oligonukleotid-Herstellung .

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Länge der RNA-Kette

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Service für kundenspezifische Anpassungen

Wir bieten eine breite Palette chemischer Modifikationen für funktionelle und anwendungsspezifische Oligonukleotide an.

• Fluoreszenzmodifikationen
• Änderungen am Terminal
• Sonstige kundenspezifische Anpassungen
• Alexa Fluor®-Fluoreszenzfarbstoffserie: 488, 647 und 750 nm
• Weitere Fluoreszenzwellenlängen sind auf Anfrage erhältlich

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Preise

Der Preis richtet sich nach dem Synthesemaßstab, der Basenlänge und dem Reinigungsverfahren. Bei Produkten, die außerhalb Japans versandt werden, können Preise und Lieferzeiten variieren.

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Übersicht

Unsere firmeneigene Technologie GenClip™ ermöglicht die Synthese langer RNA-Moleküle (100–600 Mer) mit hoher Ausbeute und hoher Qualität. GenClip™ eignet sich zudem für die Synthese von sgRNA, Prä-miRNA und mRNA. Aufgrund ihrer hohen Qualität können die mit dieser Technologie hergestellten langen RNA-Moleküle auch als analytische Standards verwendet werden.

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Hauptmerkmale der GenClip™-Technologie

• GenClip™ eignet sich für verschiedene chemische Modifikationen wie 2'-F, 2'-MOE, LNA usw.
• Die Kombination aus Festphasensynthese und enzymatischer Ligation ermöglicht im Vergleich zu herkömmlichen Methoden eine hohe Ausbeute.
• Es eignet sich für lange RNA-Moleküle mit einer Länge von 100 bis 500 Mer. (Wenn Sie RNA benötigen, die länger als 500 Mer ist, wenden Sie sich bitte an uns.)

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Veranschaulichung der Technologie

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Beispiele für unsere Arbeit

Fall 1: 100 mer sgRNA, Maßstab 100 mg

Erfolgreiche Synthese von 100-mer-sgRNA im Maßstab von 100 mg mit außergewöhnlicher Reinheit!

Eine HPLC-Analyse unter Verwendung einer für lange Nukleinsäuren optimierten Methode ergab einen bemerkenswerten Unterschied in der Reinheit: 75 % bei der herkömmlichen Methode gegenüber 94 % bei der GenClip™-Methode.
Die MS-Analyse belegte zudem die außergewöhnliche Reinheit der mit GenClip™ gewonnenen sgRNA, wobei außer Spuren von Adduktionen, die vom Analysegerät stammten, keine nennenswerten Verunreinigungen festgestellt wurden.
GenClip™ liefert sgRNA von herausragender Reinheit und Qualität – selbst im Maßstab von 100 mg.

Fall 2: 560 mer NanoLuc®-mRNA

Es gelang die Synthese einer 560-mer-mRNA, die für NanoLuc® kodiert, und die funktionelle Proteinexpression wurde mittels eines Luciferase-Assays nachgewiesen.

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• Effiziente Gen-Silencing-
  – Ermöglicht die sequenzspezifische Unterdrückung der Expression von Zielgenen über den RNA-Interferenz-Weg (RNAi)
• Hohe Zielspezifität
  — Ermöglicht die selektive Erkennung und Inaktivierung komplementärer Ziel-mRNA
• Verbesserte Nuklease-Resistenz
  — Verbessert die Stabilität von siRNA gegenüber enzymatischem Abbau durch strategische chemische Modifikationen
• Effiziente RISC-Lade
  e – Unterstützt die Einbindung des Leitstrangs in Argonaute 2 (Ago2) für eine effektive Silenzierung der Ziel-mRNA
• Reduzierte Off-Target-Effekte
  — Unterstützt eine optimierte Strangauswahl und chemische Modifikation, um unbeabsichtigtes Gen-Silencing zu minimieren
• Flexible chemische Modifikations
  en — Unterstützt verschiedene Modifikationen, darunter 2′-OMe, 2′-F, Phosphorthioat (PS) und 5′-(E)-Vinylphosphonat (VP)

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Übersicht

Wir stellen hochwertige siRNA gemäß den Anforderungen unserer Kunden unter kontrollierten Produktionsbedingungen her und ergreifen dabei geeignete Maßnahmen, um eine RNase-Kontamination während des gesamten Produktionsprozesses zu verhindern. Von der Bestellung bis zur Auslieferung gewährleisten wir einen qualitätskontrollierten Arbeitsablauf, um gleichbleibende und zuverlässige siRNA-Produkte zu gewährleisten.

Unsere siRNA-Dienstleistungen decken ein breites Spektrum an Sequenzen, chemischen Modifikationen, Überhangdesigns und Verabreichungsformen ab, um den unterschiedlichen Anforderungen in Forschung und Entwicklung gerecht zu werden.

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Unsere Kompetenzen im Bereich siRNA

Spezifikationen zu Güteklassen und Qualität

Wir bieten verschiedene Qualitätsstufen an, um unterschiedlichen Forschungsanforderungen gerecht zu werden – von Routinversuchen bis hin zu In-vivo- Studien.

Note	Reinheit	Identifizierung (MS)	Na Form	Endotoxin
RP-Kartusche	—	Theoretisches Molekulargewicht ± 2 Da	—	—
HPLC	≥ 90%	Theoretisches Molekulargewicht ± 2 Da	—	—
HPLC Plus	≥ 90%	Theoretisches Molekulargewicht ± 2 Da	Ja	—
In-vivo-EXP	≥ 90%	Theoretisches Molekulargewicht ± 2 Da	Ja	≤ 0,5 EU/mg

Chemische Modifikation

Wir bieten eine breite Palette chemischer Modifikationen an, um die Stabilität, Aktivität und andere Eigenschaften von siRNA zu optimieren.

• 2′-O-Methyl (2′-OMe)
• 2′-Fluor (2′-F)
• LNA
• Phosphorthioat (PS)
• 5′-(E)-Vinylphosphonat (VP)
• Änderungen am Terminal
• Verschiedene Kombinationen chemischer Modifikationen

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Preise

Die Preisgestaltung richtet sich nach der Qualität und den Anforderungen an die Reinigung.

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• Hohe Hybridisierungsaffinität
  — Ermöglicht eine starke Bindung an komplementäre RNA oder DNA
• Verbesserte Unterscheidung von Fehlpaarungen
  — Verbessert die Fähigkeit, perfekt übereinstimmende Sequenzen von Fehlpaarungen zu unterscheiden
• Verbesserte Nuklease-Resistenz
  — Erhöht die Stabilität von Oligonukleotiden gegenüber enzymatischem Abbau
• Entwurf kürzerer Oligonukleotide
  — Ermöglicht kürzere Sequenzen bei gleichbleibend starker Zielbindung
• Hohe Zielspezifität
  — Ermöglicht eine hochspezifische Bindung an RNA- oder DNA-Sequenzen
• Vielseitige Anwendungsmöglichkeiten
  — Geeignet für Antisense, miRNA, RNA-Nachweis und andere Anwendungen in der Nukleinsäureforschung

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Übersicht

Locked Nucleic Acid (LNA) ist eine Klasse modifizierter Oligonukleotide, bei denen der Ribosezucker durch eine molekulare Brücke zwischen der 2′-O- und der 4′-C-Position konformationsmäßig fixiert ist. Diese „verriegelte“ Struktur erhöht die Hybridisierungsaffinität und die thermische Stabilität, wenn LNA-Oligonukleotide an komplementäre DNA- oder RNA-Stränge binden, und verbessert gleichzeitig die Unterscheidung von Fehlpaarungen.

Aufgrund dieser Eigenschaften eignen sich LNA-Oligonukleotide besonders gut für Anwendungen, die eine hohe Zielspezifität erfordern, darunter der Nachweis und die gezielte Bindung an kurze oder sehr ähnliche Nukleinsäuresequenzen.

Dank unserer umfassenden Erfahrung in der Synthese von LNA-Oligonukleotiden haben wir bewährte Verfahren für die Synthese und Aufreinigung von LNA-Oligonukleotiden mit einer Vielzahl von Modifikationen und Sequenzkombinationen etabliert.

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Vorteile

• Verbesserte thermische Stabilität – Ermöglicht eine starke und stabile Hybridisierung mit komplementärer DNA oder RNA
• Hohe Sequenzspezifität – Ermöglicht die präzise Unterscheidung von Zielsequenzen, einschließlich eng verwandter Sequenzen
• Verbesserte Nuklease-Resistenz – Erhöht die Stabilität der Oligonukleotide gegenüber enzymatischem Abbau

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Unsere LNA-Kompetenzen

• Sequenzspezifische Konjugation
• Änderungen am Terminal
• Einbau eines Phosphorthioat-Grundgerüsts
• Verschiedene Kombinationen aus LNA und anderen chemischen Modifikationen

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LNA Properties

Hohe Bindungsaffinität

LNA-Nukleotide nehmen eine konformationsgebundene Zuckerstruktur an, die die für die Hybridisierung erforderliche Geometrie begünstigt. Diese Vororganisation verringert die Konformationsflexibilität des Nukleotids und trägt zu einer hohen Bindungsaffinität gegenüber komplementärer RNA und DNA bei.

Durch die Einbindung von LNA-Nukleotiden kann die Schmelztemperatur (Tm) eines Oligonukleotid-Duplexes erhöht werden. Eine höhere Tm deutet im Allgemeinen auf eine größere thermische Stabilität des mit dem komplementären Strang gebildeten Hybrids hin.

Tm: Ein häufig verwendeter Maßstab für die thermische Stabilität eines Nukleinsäure-Duplexes. Durch die Einbindung von LNA kann die Tm erhöht und die Hybridisierung mit komplementärer RNA oder DNA verstärkt werden.

Hohe Nuklease-Resistenz

Durch die Einbindung von LNA-Nukleotiden lässt sich die Resistenz von Oligonukleotiden gegenüber enzymatischem Abbau im Vergleich zu unmodifizierten Oligonukleotiden verbessern. Diese erhöhte Nuklease-Resistenz kann zu einer verbesserten Stabilität der Oligonukleotide in biologischen Umgebungen beitragen.

Die folgende Abbildung zeigt einen experimentellen Vergleich der Nuklease-Resistenz von LNA-haltigen Oligonukleotiden, Phosphorthioat (PS)-Oligonukleotiden und unmodifizierten Oligonukleotiden.

Beispiel für eine Toxizitätsstudie

In präklinischen Studien wurden die biologischen Reaktionen auf verschiedene Oligonukleotidtypen untersucht, darunter DNA, Phosphorthioat (PS)-Oligonukleotide und LNA-haltige Oligonukleotide.

In einer Studie von Wahlestedt et al. wurden die Auswirkungen der Verabreichung von Oligonukleotiden im Rattengehirn untersucht. Die Studie berichtete über entzündliche und histopathologische Reaktionen nach der Verabreichung von Phosphorthioat-Oligonukleotiden, während bei Tieren, die mit dem in der Studie untersuchten LNA-haltigen Oligonukleotid behandelt wurden, keine vergleichbaren pathologischen Befunde beobachtet wurden.

Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die biologische Reaktion auf ein Oligonukleotid je nach dessen chemischer Zusammensetzung variieren kann. Die Sicherheit und Verträglichkeit von LNA-Oligonukleotiden hängt jedoch von Faktoren wie der Sequenz, chemischen Modifikationen, der Dosis, dem Verabreichungsweg und dem Studiendesign ab.

PS: Deutlicher Anstieg der Körpertemperatur im Vergleich zu nativer DNA.
LNA: Kein signifikanter Anstieg der Körpertemperatur im Vergleich zu nativer DNA.

Quelle: Wahlestedt et al. (2000), PNAS 97, 5633–5638

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Preise

Bei Produkten, die außerhalb Japans versandt werden, variieren die Preise und Lieferzeiten.

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• Antisense-Therapeutika
• Strukturelle Verstärkung für siRNA und Aptamere
• Funktionshemmung von miRNA
• In-situ-Hybridisierungssonde für miRNA
• HPLC-Reinigung

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Übersicht

„Bridged Nucleic Acid“ (BNA™) ist ein Oberbegriff für künstliche Nukleinsäuren, die eine Vernetzungsstruktur innerhalb des Nukleinsäuremoleküls aufweisen, die bekanntermaßen für eine hohe Stabilität und eine hohe Spezifität gegenüber komplementären Strängen sorgt. Die Vernetzung schränkt den Freiheitsgrad der natürlichen Nukleinsäure ein, was die Bindungsaffinität und die enzymatische Stabilität erhöht.

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Vorteile

• Hohe Bindungsaffinität zu RNA und DNA
• Verbesserte Beständigkeit gegen enzymatischen Abbau
• Geringe In-vivo-Toxizität
• Verschiedene Änderungen

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BNA Properties

Preise

Der Preis richtet sich nach dem Synthesemaßstab, der Basenlänge und dem Reinigungsverfahren. Bei Lieferungen außerhalb Japans können Preise und Lieferzeiten variieren.